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U937細胞效率轉(zhuǎn)染條件分享
更新時間:2021-08-25   點擊次數(shù):1802次

U937細胞效率轉(zhuǎn)染條件分享

 

轉(zhuǎn)染材料準(zhǔn)備

1、轉(zhuǎn)染試劑用量10ul

2、DNA/siRNA濃度:電訊

3、細胞密度:1*106-1*105

4、轉(zhuǎn)染用培養(yǎng)板:6孔板

5、轉(zhuǎn)染試劑:AD600025 Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑

6、轉(zhuǎn)染時間:15小時

7、細胞培養(yǎng)胎牛血清:Z7181FBS-500胎牛血清

8、細胞凍存液:L0100無血清細胞凍存液

 

操作過程:

1.提前1接種細胞細胞匯合度在60-80%左右,再進行轉(zhuǎn)染

2. 核酸復(fù)合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照比例關(guān)系直接混合,用移液器吹打、混勻,室溫靜止15分鐘。

3.在細胞培養(yǎng)基加入核酸復(fù)合物根據(jù)參考用量在細胞中加入核酸復(fù)合物,并輕輕混勻;細胞培養(yǎng)基里面可以含有血清。

4.細胞換液:轉(zhuǎn)染24小時后對細胞進行正常換液,懸浮細胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

5.分析結(jié)果質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48-72小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-96小時檢測mRNA或蛋白表達。若進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后24-48小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA轉(zhuǎn)染后9小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-72小時檢測mRNA或蛋白表達。


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