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透射電鏡觀察細(xì)胞樣品實(shí)驗(yàn)檢測(cè)服務(wù)
更新時(shí)間:2021-11-16   點(diǎn)擊次數(shù):1285次

一、 透射電鏡觀察細(xì)胞樣品實(shí)驗(yàn)檢測(cè)服務(wù)實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

表格一:實(shí)驗(yàn)儀器

儀器

透射電子顯微鏡

超薄切片機(jī)

 

表格二:試劑

試劑

PBSpH7.4

無(wú)水乙醇

丙酮

1%鋨酸

Pon812包埋套裝

酸雙氧鈾

醋酸鉛

 

二、 實(shí)驗(yàn)步驟

1.  醛類固定:加入1mL 2.5%戊二醛溶液(PBS 稀釋),4度固定過(guò)夜;

2.清洗:用PBS清洗4次,每次靜置15min;

3.鋨酸固定:用1%鋨酸溶液 4度固定2h;

4.清洗:用PBS清洗4次,每次靜置15 min;

5.脫水:用50%70%、80%、90%乙醇梯度脫水各靜置15min(70%乙醇中靜置過(guò)夜),再用100%乙醇脫水2次,每次靜置20min

6.置換:用丙酮置換2次,每次靜置15min;

7.  浸漬:過(guò)程如下:

A.丙酮:包埋劑=21(體積比)的浸漬液中浸漬1h;

B.丙酮:包埋劑=12(體積比)的浸漬液中浸漬4h;

C.純包埋劑浸漬2, 每次24h;

8. 包埋:將樣品放入盛有純包埋劑的包埋板中;

10.聚合:將包埋板置于65℃條件下各聚合48h以上;
11.修塊:將包埋頭修成梯形,且樣品表面積小于0.2mm×0.2mm;

12.超薄切片:切片厚度70nm;

13.染色:醋酸雙氧鈾染色 10min后清洗;

          醋酸鉛染色 10min后清洗;

14. 上機(jī)檢測(cè)。

 


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