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細(xì)胞和組織PCR 試劑盒Plus 免核酸提取試劑盒的應(yīng)用
更新時(shí)間:2022-05-11   點(diǎn)擊次數(shù):841次

細(xì)胞和組織PCR 試劑盒Plus(免核酸提?。?/span>

貨號(hào):Nu-C01

試劑盒應(yīng)用

本試劑盒可用于動(dòng)物組織或細(xì)胞DNA 的克隆、重組細(xì)胞株鑒定、DNA 病毒鑒定、STR 鑒定等。TC-DNA-Lysis 采用配方,10 分鐘內(nèi)裂解各種細(xì)胞和組織。使用過(guò)程中無(wú)需大體積樣本、無(wú)需反復(fù)離心,從而獲得高質(zhì)量的DNA 模板。經(jīng)過(guò)驗(yàn)證,該試劑盒可以對(duì)單個(gè)細(xì)胞或10 個(gè)病毒粒子進(jìn)行檢測(cè)。

本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等域。

 

試劑盒組成

 

 

保存條件

-20o保存。

使用將TC-DNA-Lysis 室溫充分混勻,使用可4℃保存。

2×TaqMix(With Dye)溶解后需置于冰上,避免反復(fù)凍融。

 

需要準(zhǔn)備

金屬恒溫浴、離心機(jī)、PCR 

使用方法

一、不同樣品的處理方法

1. 組織液的處理

1)組織液包括組織研磨液、細(xì)胞懸液等。取10 μL組織液置于離心管中。

2)加入20 μLTC-DNA-Lysis。

3)充分混勻。

4)置于55℃作用分鐘,然后95℃作用5min。溶液即為DNA 模板。

2. 組織塊的處理

1)用眼科剪剪取1-2mm 的組織塊,并將組織塊剪成肉泥狀。

2)加入20 μL TC-DNA-Lysis。

3)充分混勻。

4)置于55℃作用分鐘,然后95℃作用5min。

510,000 轉(zhuǎn)離心60 取上清。上清即為DNA 模板。

3. DNase free 的離心管中配制PCR 反應(yīng)體系

 

4. 按照以下方法設(shè)定PCR 反應(yīng)

 

注意事項(xiàng)

一、試劑盒使用注意事項(xiàng)

1)所有試劑應(yīng)按照適合溫度儲(chǔ)存。請(qǐng)勿反復(fù)凍融。

2)使用后均需要對(duì)操作區(qū)進(jìn)行消毒,消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材均需使用商品化的無(wú)酶耗材。

3TC-DNA-Lysis 采用配方,若出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)小球狀物質(zhì)屬于正常現(xiàn)象。

4TC-DNA-Lysis 頻繁使用,可在4℃保存。不使用可放-20℃保存。

二、樣本注意事項(xiàng)

1)細(xì)胞在含/不含血清的環(huán)境中均可直接使用試劑盒。

2)擴(kuò)增2kb 以?xún)?nèi)片段,細(xì)胞樣品濃度不超過(guò)1000 個(gè)細(xì)胞。如若擴(kuò)增片段超過(guò)2kb,可適當(dāng)提高細(xì)胞濃度。

3)不同組織使用不同的眼科剪和眼科鑷進(jìn)行處理,防止交叉污染導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏差。

三、試劑盒使用過(guò)程中注意事項(xiàng)

1PCR 過(guò)程中推薦使用陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。

2)整個(gè)過(guò)程中使用的吸頭、離心管等耗材應(yīng)丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中,防止形成環(huán)境污染。

32×Master TaqMix(With Dye)已包含染料,可在反應(yīng)結(jié)束后直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。

4PCR 產(chǎn)物3末端含有A,可直接進(jìn)行TA 克隆。

四、試劑盒使用后注意事項(xiàng)

1TC-DNA-Lysis 處理后的DNA 模板可在-20℃保存至少個(gè)月。避免反復(fù)凍融,防止基因組斷裂。

2PCR 反應(yīng)完成后,嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)區(qū)開(kāi)蓋。應(yīng)在污染區(qū)進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,防止氣溶膠污染。

3)為防止試劑盒污染,請(qǐng)勿將不同批號(hào)試劑盒混用。

檢測(cè)實(shí)例

 

常見(jiàn)問(wèn)題解析


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