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293無血清培養(yǎng)基使用方法及馴化方式介紹2023產品已更新
更新時間:2023-12-05   點擊次數:950次

CELL-WISE 293培養(yǎng)基品

貨號:CW001

CELL-WISE 293培養(yǎng)基品牌產品特點:

瞬時轉染用培養(yǎng)基,適用于HEK293細胞高密度懸浮培養(yǎng)

無蛋白、無動物源、化學成分限定

即用型培養(yǎng)基,無需添加額外成分

CELL-WISE的293培養(yǎng)基參數規(guī)格:

外觀:

澄清透明紅色液體

滲透壓:

275±15 mOSM

pH:

6.9-7.4

無菌檢測:

無菌

內毒素:

<5 EU/mL

儲存條件

:2-8℃,避光

效期:

12個月

產品用途:

僅用于科學研究,不適用于人類或動物的診斷和治療

CELL-WISE的293培養(yǎng)基使用方法:

細胞馴化

1)直接馴化

大部分情況下,培養(yǎng)于其他培養(yǎng)基中的細胞,可以直接適應Balance CD 293 medium,只要按照日常傳代方式(稀釋)更換培養(yǎng)基即可。

2)漸進式馴化

注意:選用低代次、處于對數期的細胞進行馴化

①在原培養(yǎng)基中復蘇細胞并繼續(xù)使用該培養(yǎng)基傳代2到3次至細胞生長穩(wěn)定,當細胞密度達到2x10 6 cells/ml后進行傳代,傳代細胞密度控制在0.5-0.6×10 6 cells/mL,5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293培養(yǎng)基的比例為75:25;

②將細胞置于37℃,5% CO2,轉速為110-175 rpm的恒溫搖床中進行培養(yǎng);

③當細胞密度3-4天后達到3x10 6 cells/ml且細胞活率>90%,傳代時5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293培養(yǎng)基的比例為50:50,細胞密度控制在0.5×10 6 cells/mL。如細胞生長慢,可離心上清,留20%條件培養(yǎng)基,加入80%的5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293 培養(yǎng)基比例為75:25的混合培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng);

④重復步驟③逐步增加Balance CD 293培養(yǎng)基所占的比例(5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293 培養(yǎng)基的比例為25:75至10:90)直到100%的Balance CD 293培養(yǎng)基;

⑤經過在100%的 Balance CD 293 培養(yǎng)基中的幾次傳代培養(yǎng),傳代后3-4天細胞的密度可以達到2-3×10 6 cells/mL,細胞活率大于90%,這說明細胞已經適應了Balance CD 293 培養(yǎng)基。之后進行細胞的傳代培養(yǎng)時,細胞的起始密度可以降到0.3×10 6 cells/mL,般傳代2-3次后再進行轉染實驗。

注意: 般細胞馴化過程中,三代細胞的狀態(tài)可能不是很好,但般從第四代狀態(tài)會有改善。


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